细胞生物实验的基础是细胞培养。只有当细胞状态良好时，我们才能完成下游实验，如最常见的细胞转染、药物治疗等。那么细胞培养的概念是什么（这里涉及的细胞都是动物细胞）。
1. 细胞培养是什么？
是指在人工培养条件下，将组织从动物活体中取出，分散成单个细胞（机械或酶消化），模拟体内生理环境，保持生长、分裂繁殖、细胞接触抑制、细胞衰老过程等生命现象。
一般有两种最常见的细胞，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。
原代细胞是指动物组织通过胰酶或胶原酶等酶消化分散，从而获得单个细胞，然后在培养容器中生长的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备方法略有不同，细胞生长速度和难度也有所不同。一般生产过程如下（不同的原代细胞生产过程略有不同）：
（1）取组织，放入平皿中。用无Ca2 、Mg2 的PBS洗涤组织2-3次。
(2)用无用的方式切割胚体Ca2 、Mg2 的PBS振荡洗涤，静置片刻，待胚块沉淀后吸去上清，重复3次。
(3)加胰酶(最终浓度0).625%），置37℃消化到胚块起毛(大组织块边缘像纤毛运动)。
(4)弃上清，加入含小牛血清Hank’s液体，用滴管反复吹到看不见组织块。
(5)用200目细胞筛过滤到刻度尖底离心管，离心10 min。
（6）弃上清，加入少量生长液吹散细胞沉淀，按细胞压积（1:300）加生长液，分装入细胞培养瓶，置培养箱培养。
不同的原代细胞有不同的形状。10代以内的细胞通常被称为原代细胞。
代际细胞一般是指无限繁殖的细胞系统，理论上可以无限代际地传播。这些细胞也经常用于实验，如Hela、 293、Vero等细胞。
2. 细胞生长周期
每一代细胞的生长周期(以此为例)一般分为游离期、贴壁期、潜伏期、对数生长期和停止期。
游离期:从几分钟到几个小时，细胞刚接种到新的培养容器，然后粘在墙上。
贴壁期:细胞从游离状态变为粘附在培养器皿表面显示某种细胞形态的时期。
潜伏期:细胞贴壁后，不会立即增殖，而是会储备增殖所需的物质和能量。这个时候叫潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后开始大量增殖。这一时期的细胞充满活力和稳定，我们做的大部分实验都是在这一时期进行的。
停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越高。由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。此时，我们需要代替细胞，使细胞继续增殖，保持活力。
3. 细胞生长需要营养条件
细胞培养所需的营养成分一般来自基础培养基(如DMEM培养基）和血清。
基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K ，Na 等)，碳水化合物(碳源和能源)和一些营养物质，如激素。
血清：主要提供一些基本培养基不能提供的生长因子和低分子营养物质。此外，它还能促进细胞的壁贴，中和有害重金属离子。
如果只提供基本的培养基而不提供血清，绝大多数细胞就无法生长。血清对我们实验的重要性是不言而喻的，那么什么样的血清是合格的呢？
合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌、无真菌、无支原体检测和无病毒污染。血清含有大量蛋白质等成分，血清一般呈淡黄色白质等成分，会稍粘。的TransSerum? EQ Fetal Bovine Serum (FS以201-02为例，通过检测牛腹泻病毒、牛副流感病毒、牛呼肠孤独病毒、狂犬病病毒、牛腺病毒、牛细小病毒和支原体，安全可靠。以澳大利亚健康胎牛血为原料加工而成，3 次0.1 μm 微孔滤膜过滤，无支原体污染，内毒素水平极低。也适用于间充质干细胞的培养。使用列在下表中EQ一些血清培养的细胞供参考。
除了基本的培养基和血清外，还可以使用其他一些试剂来培养细胞，如消化壁细胞所必需的Trypsin（FG301-01 或FG301-11)1-11)PBS（FG701-01），双抗Penicillin-Streptomycin（FG101-01）等。
4. 影响细胞生长的因素
对细胞生长影响较大的点主要有以下三个方面：
（1）细胞的营养来源：主要是指血清和培养基只要培养基根据不同的细胞类型选择不同的基础培养基，就相对简单。血清有很多问题。让我们在这里介绍一下。
在我们的实验中，使用较多的血清是胎牛血清，血清是一种非人工产品，成分复杂，偶尔沉淀是正常现象，可能出现在各种品牌的血清产品中。这些沉淀主要是蛋白质、盐和脂肪酸的沉淀。血清制成完全培养基后，这些成分可能溶解在培养基中，对促进血清细胞生长没有明显影响。这里需要强调的是，要区分血清中的絮状沉淀和血清污染，后者绝对不能使用。
在日常使用中，血清中的沉淀可能会在很多情况下增加，如热灭活、反复冻融、融化、γ2-8长期存放射线照射℃等。说到血清融化，有必要强调不要从-20开始℃从冰箱里取出的血清直接放在室温或37℃由于水浴中血清融化迅速，温差大容易引起血清沉淀。建议血清从-20℃冰箱取出后，2-8℃解冻过夜，溶解过程中注意不时摇动，使其溶解均匀。血清融解后，分装成我们需要的小份-20℃可长期保存。
我们经常听到的另一种血清处理方法是热灭活。什么是热灭活？热灭活主要是灭活血清中的补体，一般灭活条件为56℃，30分钟处理已解冻的血清。实验表明，大多数细胞不需要正确处理的热灭活血清。因此，如果没有必要，就不需要做热处理。这样既节省了宝贵的时间，又保证了血清的质量。但在一些实验中，如免疫学研究和培养ES在培养细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，建议使用热灭活血清，因为补体的存在会显著影响这些实验的结果。
（2）气体和pH：气体也是细胞生存的必要条件之一，主要需要氧和二氧化碳。在开放式培养中，细胞通常在95%空气和5%二氧化碳的混合气体环境中培养。大多数动物细胞需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2-7.4。我们现在使用的大多数缓冲系统都是碳酸氢钠缓冲系统，结合一定浓度的二氧化碳，可以提供更有效的缓冲系统，主要是为了防止pH值变化迅速。
（3）温度：培养细胞的最适温度相当于各种细胞或组织取材机体的正常温度。人类和哺乳动物细胞培养的最适宜温度为35℃-37℃。如果温度过高或过低，会对细胞的生长和生存状态产生明显影响。温度不超过39℃当细胞代谢强度与温度成正比时，细胞培养位于39℃-40℃环境中1 h，也就是说，当温度达到43时，会受到一定程度的损伤，但仍能恢复；℃许多细胞会在上述情况下死亡。当温度下降到20-3000时℃细胞代谢减少，与培养基的物质交换减少。因此，为了保持细胞良好的生长环境，我们尽可能使它们在适当的温度下生长。
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